酶標板封閉前的清洗
酶標板或者又(yòu)叫做一次性(xìng)(細胞細菌)培養板,基本都是透明(míng)顏色,PS(聚苯乙烯)材料做成,一般根據酶標板與蛋(dàn)白(bái)和其它分子結合能力的不同(tóng),分為高結(jié)合力,中結合力和氨基化的。
1)高結合力
此種酶標板(bǎn),表麵經處理後,其蛋白結合能力大大(dà)增強,可達300-400ng lgG/cm2主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,並可相對減少包(bāo)被蛋(dàn)白的濃度和用量,不足之處為較易產生非特異性反應。抗原或抗體包被後,以非離(lí)子去(qù)汙劑無法有效地封閉(bì)未結合蛋白的部(bù)位,需使用蛋白作(zuò)為封閉劑。
2)中結合力
此類酶(méi)標板經表麵疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白(bái)的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng 1gG/cm2,由於該類酶標板所具有(yǒu)的僅與大分子結合的特性,適用於作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛(qián)在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去汙(wū)劑作為封閉液。
3)氨基(jī)化
這種酶標板經表麵改性處理後擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水(shuǐ)鍵取代。該類(lèi)酶標板適合作為小分(fèn)子蛋白的(de)固相載體。使用(yòng)合適的緩衝液(yè)和pH值(zhí),其表麵可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由於其表麵的親水特(tè)性和可通過其它交聯劑共價結合的能力,可用於固定溶於Triton-100、Tween 20等去汙劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由於降低了疏水性,一部(bù)分蛋白分子無法(fǎ)結合;此外,其表麵需有效(xiào)地封閉(bì)。由於親水和共價的表麵特(tè)性,使用的封閉液必須能夠與非反應性(xìng)氨基基(jī)團和(hé)所選擇的交聯劑中任何功能基團發生作用。
等離子體(tǐ)清洗可以對酶標板材料的整體、局部或複雜結構部(bù)分(fèn)進(jìn)行清洗;在完成清洗去汙的同時,還可以改善材料本身的表麵性(xìng)能。如提高表麵的潤濕性能、改善膜的黏著力等,這在酶標板的加(jiā)工製造過程中是(shì)非(fēi)常(cháng)重要的
聚苯乙烯酶標板經等離子接枝處理後,能在基體表麵(miàn)引入醛(quán)基、氨基、環氧基等活性官能團,提(tí)高基體表麵的浸潤性、表麵(miàn)能(néng),使酶(méi)牢牢地固定在載(zǎi)體上麵,提高酶的固定性。經達因筆測試(shì),PS材料處理前是38達因左右,處(chù)理後是72達因左右,表麵張力值得到極(jí)大(dà)的改善。